La ultramicrotomía es el procedimiento donde logramos obtener un corte muy delgado, a partir de una muestra previamente incluida en resina, lo que nos permite poder observarla en al microscopio electrónico mediante el bombardeo con electrones de 50 a 125 kV que tienen que atravesar estos cortes ultrafinos.
En cuanto a la resolución óptima se necesitan cortes de 30 a 60 nm que son identificados mediante el color que producen al reflejarles luz.
La ultramicrotomía es una técnica exigente que requiere mucha práctica y paciencia ya que desde un comienzo hay que tener consideraciones especiales tanto como la preparación de la muestra e inclusión como confección de cuchillos y grillas de soporte para la muestra requiriendo además es muy importante que se tenga un conocimiento profundo de todos los equipos que participan en el proceso de la ultramicrotomía.
Durante el proceso de obtención de cortes obtenemos en primer lugar cortes ultrafinos (espesor entre 50 a 100 nm) adecuados para visualización en el microscopio electrónico y cortes semifinos o "gruesos" en un rango de 0,5 a 2 um. Estos cortes debido a su tamaño se utilizan para determinar áreas de estudio y orientación de bloques.
Para que este proceso tenga éxito es necesario que cada uno de los pasos del procedimiento haya sido realizado adecuadamente tanto en fijación, deshidratación, inclusión.
El instrumento especializado para obtener cortes se llama ultramicrótomo y permite movimientos precisos y repetibles utilizando un avance térmico o mecánico, luego los cortes flotan en la superficie del agua contenida en la balsa del cuchillo y finalmente son recogidos en una grilla para su posterior tinción con sales de metales pesados para aumentar marcaje.
A continuación explicare los pasos en la preparación y obtención de cortes para su análisis.
I) Ultramicrotomía
• Moldear el bloque de tejido
a) Tallado del bloque a mano
b) Corte semifino
• Observación del corte semifino al Microscopio Óptico (MO)
II) Obtención de cuchillos
• Cuchillos de vidrio
En cuanto a la resolución óptima se necesitan cortes de 30 a 60 nm que son identificados mediante el color que producen al reflejarles luz.
La ultramicrotomía es una técnica exigente que requiere mucha práctica y paciencia ya que desde un comienzo hay que tener consideraciones especiales tanto como la preparación de la muestra e inclusión como confección de cuchillos y grillas de soporte para la muestra requiriendo además es muy importante que se tenga un conocimiento profundo de todos los equipos que participan en el proceso de la ultramicrotomía.
Durante el proceso de obtención de cortes obtenemos en primer lugar cortes ultrafinos (espesor entre 50 a 100 nm) adecuados para visualización en el microscopio electrónico y cortes semifinos o "gruesos" en un rango de 0,5 a 2 um. Estos cortes debido a su tamaño se utilizan para determinar áreas de estudio y orientación de bloques.
Para que este proceso tenga éxito es necesario que cada uno de los pasos del procedimiento haya sido realizado adecuadamente tanto en fijación, deshidratación, inclusión.
El instrumento especializado para obtener cortes se llama ultramicrótomo y permite movimientos precisos y repetibles utilizando un avance térmico o mecánico, luego los cortes flotan en la superficie del agua contenida en la balsa del cuchillo y finalmente son recogidos en una grilla para su posterior tinción con sales de metales pesados para aumentar marcaje.
A continuación explicare los pasos en la preparación y obtención de cortes para su análisis.
I) Ultramicrotomía
• Moldear el bloque de tejido
a) Tallado del bloque a mano
b) Corte semifino
• Observación del corte semifino al Microscopio Óptico (MO)
II) Obtención de cuchillos
• Cuchillos de vidrio
