Si se necesita orientar u obtener una viste previa de la muestra, como normalmente se realiza, el bloque tallado se monta en un ultramicrótomo y se realizan cortes gruesos de 0,5-2,0 um. Los cuchillos mas usados para este proceso son los de vidrio y deben ser nuevos, se obtienen cortes semifinos que caen en una balsa previamente llenada con agua y se mantienen ahí.
Comúnmente se utiliza una marca que hay en la nuez para la ubicación especial del tejido. El ángulo de corte de la pieza de 0 a 10 mm se utiliza 4.5°.
Para asegurar un buen desplazamiento del cuchillo, el borde debe ser ajustado de modo que sea paralelo a la cara de corte del bloque.
El mecanismo de avance del cuchillo es posible ya que la cara de corte no tiene contacto con el cuchillo al momento de comenzar un nuevo corte. Para realizar los cortes es necesario el uso de cuchillos nuevos y controlar el movimiento, lo que se hace mirando directamente hacia abajo en el bloque y moviendo el cuchillo.
Hay que tener especial consideración en la orientación adecuada antes de realizar el corte realizando un acercamiento lento. Debe hacerse con cuidado, ya que, es uno de los pasos más difíciles.
Se debe orientar el bloque en el brazo del ultramicrótomo de modo que el borde que primero entra en contacto con el cuchillo es paralelo al borde de cuchilla y horizontal a la mesa.
También es importante revisar que la cara de corte del bloque de tejido se mueve paralelo al plano de corte, lo que, asegura que el cuchillo realice un corte completo.
Hay que evitar realizar errores que se pueden hacer durante la orientación de la muestra como empujar la cara de corte del bloque hacia el cuchillo y no retraer el cuchillo después de hacer ajustes que resulta en la reducción de un corte semifino.
Luego de tomar en cuenta todas estas consideraciones se coloca agua en la balsa del cuchillo y se enciende el motor del ultramicrótomo para realizar los cortes de forma automática para que rebaje el taco, controlando el nivel del agua para que no se moje el taco secándolo utilizando papel mantequilla.
El color óptimo que se debe obtener es gris pero por condiciones del cuchillo a lo más se obtiene un color dorado en los cortes.
Luego para retirarlos del agua se utiliza un palito de madera delgado con una pestaña adherida a el, con la cual se toman estos cortes y son transferidos a una gota de agua destilada en un portaobjeto de vidrio.
Se utiliza este método para recoger los cortes gruesos y finos, del agua y transferirlos por medio de una pestaña a portaobjetos de vidrio y después del secado de la lámina en una platina caliente, el corte grueso se puede teñir para examinarlo al microscopio óptico. Se deben tomar entre 6 a 7 cortes.
• Bibliografía
Electron microscopy: principles and techniques for biologists / John J. Bozzola, Lonnie D. Russell., 2a ed., LinkSudbury : Jones and Bartlett, c1999. Capítulo 4, Páginas 73-104.
Comúnmente se utiliza una marca que hay en la nuez para la ubicación especial del tejido. El ángulo de corte de la pieza de 0 a 10 mm se utiliza 4.5°.
Para asegurar un buen desplazamiento del cuchillo, el borde debe ser ajustado de modo que sea paralelo a la cara de corte del bloque.
El mecanismo de avance del cuchillo es posible ya que la cara de corte no tiene contacto con el cuchillo al momento de comenzar un nuevo corte. Para realizar los cortes es necesario el uso de cuchillos nuevos y controlar el movimiento, lo que se hace mirando directamente hacia abajo en el bloque y moviendo el cuchillo.
Hay que tener especial consideración en la orientación adecuada antes de realizar el corte realizando un acercamiento lento. Debe hacerse con cuidado, ya que, es uno de los pasos más difíciles.
Se debe orientar el bloque en el brazo del ultramicrótomo de modo que el borde que primero entra en contacto con el cuchillo es paralelo al borde de cuchilla y horizontal a la mesa.
También es importante revisar que la cara de corte del bloque de tejido se mueve paralelo al plano de corte, lo que, asegura que el cuchillo realice un corte completo.
Hay que evitar realizar errores que se pueden hacer durante la orientación de la muestra como empujar la cara de corte del bloque hacia el cuchillo y no retraer el cuchillo después de hacer ajustes que resulta en la reducción de un corte semifino.
Luego de tomar en cuenta todas estas consideraciones se coloca agua en la balsa del cuchillo y se enciende el motor del ultramicrótomo para realizar los cortes de forma automática para que rebaje el taco, controlando el nivel del agua para que no se moje el taco secándolo utilizando papel mantequilla.
El color óptimo que se debe obtener es gris pero por condiciones del cuchillo a lo más se obtiene un color dorado en los cortes.
Luego para retirarlos del agua se utiliza un palito de madera delgado con una pestaña adherida a el, con la cual se toman estos cortes y son transferidos a una gota de agua destilada en un portaobjeto de vidrio.
Se utiliza este método para recoger los cortes gruesos y finos, del agua y transferirlos por medio de una pestaña a portaobjetos de vidrio y después del secado de la lámina en una platina caliente, el corte grueso se puede teñir para examinarlo al microscopio óptico. Se deben tomar entre 6 a 7 cortes.
• Bibliografía
Electron microscopy: principles and techniques for biologists / John J. Bozzola, Lonnie D. Russell., 2a ed., LinkSudbury : Jones and Bartlett, c1999. Capítulo 4, Páginas 73-104.
