En su estado liquido normal, los glicéridos y ácidos grasos son siempre isotrópicos o monorrefringentes; pero al enfriarse o después de ser fijados con formol, pueden formar cristales anisotrópicos o birrefringentes.
En la práctica, los lípidos birrefringentes en mamíferos son el colesterol y esteres cristalinos. Los ésteres del colesterol se distinguen del resto de los lípidos porque, con luz polarizada, producen las llamadas Cruces de Malta.
Otras estructuras como el amiloide y el talco de los guantes también son birrefringentes.
*Lisocromos
Los lisocromos tiñen material lipídico porque son más solubles en éstos que en el solvente en el que se encuentran al momento de ser aplicados (transferencia de colorante por solubilidad diferencial).
El poder de adsorción de las grasas esta determinado por la concentración del colorante, la temperatura y el estado físico de las grasas, el mayor grado de adsorción del colorante ocurre a temperaturas cercanas a su punto de fusión. Solo los lípidos en estado liquido o semi-sólidos a Tº de tinción, pueden ser teñidos; los que se encuentran sólidos o cristalinos no son afectados. La tinción de lípidos es afectada por el solvente usado por el lisocromo.
El primer lisocromo introducido fue el Sudan III, otros son el Sudan IV y el aceite rojo O, pero el más sensible y versátil de estos colorantes es el Sudan black B, el que tiñe tanto fosfolípidos como grasas neutras. Otro punto importante es el solvente en que se encuentra el colorante. Este, al ser un solvente orgánico, debe estar lo suficientemente diluido para aminorar la eventual extracción de los lípidos que pudiese provocar. Varios solventes han sido utilizados, como el isopropanol, trietil fosfato, propilenglicol, etc. Para uso general, etanol 70% es un solvente adecuado para el aceite rojo O y Sudan black B.
Sudan Black B puede disolverse en lípidos hidrofóbicos (apolares), pero al poseer dos átomos de nitrógeno potencialmente ionizables, puede considerarse además como un colorante catiónico, pudiendo unirse a lípidos hidrofílicos (polares) como fosfolípidos, en los que son más solubles que otros sudanes. Los dos componentes principales (orto y para isómeros) se muestran a continuación:
El para-isomero es más básico que el orto-isomero, ya que en el último uno de los nitrógenos potencialmente ionizables se encuentra unido por puente de hidrogeno con un nitrógeno azo, inhibiendo su ionización.
En la práctica, los lípidos birrefringentes en mamíferos son el colesterol y esteres cristalinos. Los ésteres del colesterol se distinguen del resto de los lípidos porque, con luz polarizada, producen las llamadas Cruces de Malta.
Otras estructuras como el amiloide y el talco de los guantes también son birrefringentes.
*Lisocromos
Los lisocromos tiñen material lipídico porque son más solubles en éstos que en el solvente en el que se encuentran al momento de ser aplicados (transferencia de colorante por solubilidad diferencial).
El poder de adsorción de las grasas esta determinado por la concentración del colorante, la temperatura y el estado físico de las grasas, el mayor grado de adsorción del colorante ocurre a temperaturas cercanas a su punto de fusión. Solo los lípidos en estado liquido o semi-sólidos a Tº de tinción, pueden ser teñidos; los que se encuentran sólidos o cristalinos no son afectados. La tinción de lípidos es afectada por el solvente usado por el lisocromo.
El primer lisocromo introducido fue el Sudan III, otros son el Sudan IV y el aceite rojo O, pero el más sensible y versátil de estos colorantes es el Sudan black B, el que tiñe tanto fosfolípidos como grasas neutras. Otro punto importante es el solvente en que se encuentra el colorante. Este, al ser un solvente orgánico, debe estar lo suficientemente diluido para aminorar la eventual extracción de los lípidos que pudiese provocar. Varios solventes han sido utilizados, como el isopropanol, trietil fosfato, propilenglicol, etc. Para uso general, etanol 70% es un solvente adecuado para el aceite rojo O y Sudan black B.
Sudan Black B puede disolverse en lípidos hidrofóbicos (apolares), pero al poseer dos átomos de nitrógeno potencialmente ionizables, puede considerarse además como un colorante catiónico, pudiendo unirse a lípidos hidrofílicos (polares) como fosfolípidos, en los que son más solubles que otros sudanes. Los dos componentes principales (orto y para isómeros) se muestran a continuación:
El para-isomero es más básico que el orto-isomero, ya que en el último uno de los nitrógenos potencialmente ionizables se encuentra unido por puente de hidrogeno con un nitrógeno azo, inhibiendo su ionización.
