La presencia de dobles enlaces (grupos etilenos) en las cadenas de ácidos grasos puede ser usada para distinguir entre lípidos saturados e insaturados.
*Método de OTAN (osmium tetroxide-α-naphthylamine)
Tetróxido de osmio: el tetróxido de osmio oxida las uniones -CH=CH- para luego ser reducido a una sustancia negra, probablemente dióxido de osmio. El tetróxido de osmio es soluble tanto en solventes polares como apolares, por lo tanto sirve tanto para identificar lípido hidrofóbicos como hidrofílicos. En cortes por congelación el tetróxido de osmio forma esteres cíclicos con sitios hidrofóbicos e hidrofílicos, por adición, en esta reacción la oxidación ocurre en los átomos de carbono y el osmio es reducido de +8 a +6:
Cuando dos enlaces insaturados son oxidados simultáneamente puede haber uniones cruzadas, formando un diester:
Otro compuesto formado durante la reacción es trióxido de osmio. Este es inestable y dará origen a tetróxido de osmio (soluble) y dióxido de osmio (insoluble):
Se puede diferenciar lípidos insaturados hidrofóbicos de hidrofílicos mediante la utilización de clorato de potasio. El ion clorato oxida el dióxido osmio, formado en las uniones hidrofílicas, a tetróxido de osmio:
Los lípidos insaturados hidrofílicos, de esta forma, permanecen convertidos en esteres de osmio cíclicos, los que pueden tener un color café muy tenue, apenas perceptible. En los sitios hidrofóbicos la precipitación de dióxido de osmio es facilitada, tanto que puede observarse un color negro intenso. Los esteres de lípidos insaturados hidrofílicos pueden ser subsecuentemente coloreados tratando los cortes con α-naphthylamina, que forma un complejo rojo o anaranjado al unirse con el osmio, esta reacción forma la base de la OTAN (osmium tetroxide-α-naphthylamine), método para diferenciar lípidos hidrofóbicos de hidrofílicos.
La reacción de tetróxido de osmio se utiliza para identificar lípidos insaturados más que para diferenciar entre hidrofóbicos de hidrofílicos, puesto que puede presentar resultados erróneos. También se debe tener presente la reacción del tetróxido de osmio con los grupos fenólicos presentes en algunas proteínas, por lo que se hace necesaria la utilización de controles.
*Método de Schiff ultravioleta
Belt & Hayes utilizaron la luz ultravioleta para oxidar los dobles enlaces a aldehídos, para subsecuentemente ser teñidos con el reactivo de Schiff. Este es una alternativa a la utilización de tetróxido de osmio, siendo más económica y no toxica.
Para realizar el mismo método se puede utilizar un tratamiento con Ácido fórmico para la oxidación de los dobles enlaces a aldehídos.
*Método de OTAN (osmium tetroxide-α-naphthylamine)
Tetróxido de osmio: el tetróxido de osmio oxida las uniones -CH=CH- para luego ser reducido a una sustancia negra, probablemente dióxido de osmio. El tetróxido de osmio es soluble tanto en solventes polares como apolares, por lo tanto sirve tanto para identificar lípido hidrofóbicos como hidrofílicos. En cortes por congelación el tetróxido de osmio forma esteres cíclicos con sitios hidrofóbicos e hidrofílicos, por adición, en esta reacción la oxidación ocurre en los átomos de carbono y el osmio es reducido de +8 a +6:
Cuando dos enlaces insaturados son oxidados simultáneamente puede haber uniones cruzadas, formando un diester:
Otro compuesto formado durante la reacción es trióxido de osmio. Este es inestable y dará origen a tetróxido de osmio (soluble) y dióxido de osmio (insoluble):
Se puede diferenciar lípidos insaturados hidrofóbicos de hidrofílicos mediante la utilización de clorato de potasio. El ion clorato oxida el dióxido osmio, formado en las uniones hidrofílicas, a tetróxido de osmio:
Los lípidos insaturados hidrofílicos, de esta forma, permanecen convertidos en esteres de osmio cíclicos, los que pueden tener un color café muy tenue, apenas perceptible. En los sitios hidrofóbicos la precipitación de dióxido de osmio es facilitada, tanto que puede observarse un color negro intenso. Los esteres de lípidos insaturados hidrofílicos pueden ser subsecuentemente coloreados tratando los cortes con α-naphthylamina, que forma un complejo rojo o anaranjado al unirse con el osmio, esta reacción forma la base de la OTAN (osmium tetroxide-α-naphthylamine), método para diferenciar lípidos hidrofóbicos de hidrofílicos.La reacción de tetróxido de osmio se utiliza para identificar lípidos insaturados más que para diferenciar entre hidrofóbicos de hidrofílicos, puesto que puede presentar resultados erróneos. También se debe tener presente la reacción del tetróxido de osmio con los grupos fenólicos presentes en algunas proteínas, por lo que se hace necesaria la utilización de controles.
*Método de Schiff ultravioleta
Belt & Hayes utilizaron la luz ultravioleta para oxidar los dobles enlaces a aldehídos, para subsecuentemente ser teñidos con el reactivo de Schiff. Este es una alternativa a la utilización de tetróxido de osmio, siendo más económica y no toxica.
Para realizar el mismo método se puede utilizar un tratamiento con Ácido fórmico para la oxidación de los dobles enlaces a aldehídos.
