Los glicolípidos forman parte de la bicapa lipídica de la membrana celular; la parte glucídica de la molécula está orientada hacia el exterior de la membrana plasmática y es un componente fundamental del glicocálix, donde actúan en el reconocimiento celular y como receptores antigénicos.
Entre los principales glúcidos que forman parte de los glicolípidos encontramos: Galactosa, Manosa, Fructosa, Glucosa, N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina, Ácido siálico.
Son fuertemente hidrofílicos y son fácilmente solubles en agua. Existen 3 tipos:
- Cerebrósidos
- Sulfátidos
- Gangliósidos
Cerebrósidos
Son ceramidas de carácter neutra a las que se adiciona, por unión glicosídica al grupo hidroxilo terminal de la esfingosina, una hexosa, comúnmente β-D-galactosa.
Ceramida
Estos lípidos pueden ser demostrados por reacciones especificas de sus hexosas.
*Método de PAS modificado
- Grupos aminos convertidos a carbonilos mediante la cloramina T.
- El acido performico, oxida las uniones lípido etileno a aldehídos .
- Posterior bloqueo con dinitrofenil-hidrazina, junto con los aldehídos existentes.
*Método de Azul de toluidina/Acetona
Se utiliza principalmente en la identificación de Leucodistrófia metacromática.
Protocolo
-Con azul de toluidina 16-18 hrs. (lavar)
-Deshidratación en acetona 5 min. (montar en DPX).
+Resultados: Depósitos de sulfato café, amarillo o púrpura.
*Método de Acriflavina-DMAB
Esta técnica es una adaptación del método de tinción acriflavina para mucopolisacáridos sulfatados.
Protocolo
-Fluorescencia de complejos sulfátido-acriflavina → color naranjo en luz UV. (6 min)
-Diferenciación con Isopropanol 1 min.
-Producto de reacción pigmento estable de color rojo usando p-dimetilamino-benzaldehido por (DMAB) 30-45 seg.
+Resultados: Sulfátidos color rojo.
-Se deben usar secciones control des-lipidizadas.
Gangliósidos
Se asemejan a los cerebrósidos, pero tienen un oligosacárido en lugar de una sola hexosa.
El ácido siálico o N-acetilneuramínico está siempre presente. Ellos tienen estructuras tales como NANA (ácido neuroamínico). Presentan carácter ácido.
*Método Borohidrato - Peryodato-Schiff (BHPS)
Protocolo
- Eliminación de los grupos R-CHO existentes: reducción → Borohidrato de Na+ 0.1M (0.38%)
- Oxidación → peryodato de Na+ (0.114%). 5 min.
- Tinción con Reactivo Schiff
- Tinción de contraste: Hematoxilina de Mayer, Hematoxilina Carazzi
- Montaje.
+Resultados: Gangliósidos rojos y Núcleos azules.
*Resumen métodos de identificación de Glicolípidos
Entre los principales glúcidos que forman parte de los glicolípidos encontramos: Galactosa, Manosa, Fructosa, Glucosa, N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina, Ácido siálico.
Son fuertemente hidrofílicos y son fácilmente solubles en agua. Existen 3 tipos:
- Cerebrósidos
- Sulfátidos
- Gangliósidos
Cerebrósidos
Son ceramidas de carácter neutra a las que se adiciona, por unión glicosídica al grupo hidroxilo terminal de la esfingosina, una hexosa, comúnmente β-D-galactosa.
CeramidaEstos lípidos pueden ser demostrados por reacciones especificas de sus hexosas.
*Método de PAS modificado
- Grupos aminos convertidos a carbonilos mediante la cloramina T.
- El acido performico, oxida las uniones lípido etileno a aldehídos .
- Posterior bloqueo con dinitrofenil-hidrazina, junto con los aldehídos existentes.
- Reacción de PAS para teñir hexosas; los tejidos son incubados en ácido peryódico para oxidar las hexosas (1,2 glicol) a aldehídos, y estos son finalmente revelados por condensación con el reactivo de Schiff.
- Resultados se comparan con una sección delipidizada (glicolipidos-hexosas no lipidas).
Sulfátidos
Son cerebrósidos en los que uno de los grupos hidroxilos de la hexosa está esterificado por un ácido sulfúrico (ésteres de sulfato), presentan carácter altamente ácido.
Se utiliza principalmente en la identificación de enfermedades con depósitos de lípidos producido por un almacenamiento de sulfátido.
Este compuesto tiene la propiedad de inducir metacromasia (anilina básica) por lo que de utiliza como sustrato en esta técnica el Azul de Toluidina que es el colorante standard para exhibir metacromasia.
- Resultados se comparan con una sección delipidizada (glicolipidos-hexosas no lipidas).
Sulfátidos
Son cerebrósidos en los que uno de los grupos hidroxilos de la hexosa está esterificado por un ácido sulfúrico (ésteres de sulfato), presentan carácter altamente ácido.
Se utiliza principalmente en la identificación de enfermedades con depósitos de lípidos producido por un almacenamiento de sulfátido.
Este compuesto tiene la propiedad de inducir metacromasia (anilina básica) por lo que de utiliza como sustrato en esta técnica el Azul de Toluidina que es el colorante standard para exhibir metacromasia.
*Método de Azul de toluidina/Acetona
Se utiliza principalmente en la identificación de Leucodistrófia metacromática.
Protocolo
-Con azul de toluidina 16-18 hrs. (lavar)
-Deshidratación en acetona 5 min. (montar en DPX).
+Resultados: Depósitos de sulfato café, amarillo o púrpura.
*Método de Acriflavina-DMAB
Esta técnica es una adaptación del método de tinción acriflavina para mucopolisacáridos sulfatados.
Protocolo
-Fluorescencia de complejos sulfátido-acriflavina → color naranjo en luz UV. (6 min)
-Diferenciación con Isopropanol 1 min.
-Producto de reacción pigmento estable de color rojo usando p-dimetilamino-benzaldehido por (DMAB) 30-45 seg.
+Resultados: Sulfátidos color rojo.
-Se deben usar secciones control des-lipidizadas.
Gangliósidos
Se asemejan a los cerebrósidos, pero tienen un oligosacárido en lugar de una sola hexosa.
El ácido siálico o N-acetilneuramínico está siempre presente. Ellos tienen estructuras tales como NANA (ácido neuroamínico). Presentan carácter ácido.
*Método Borohidrato - Peryodato-Schiff (BHPS)
Protocolo
- Eliminación de los grupos R-CHO existentes: reducción → Borohidrato de Na+ 0.1M (0.38%)
- Oxidación → peryodato de Na+ (0.114%). 5 min.
- Tinción con Reactivo Schiff
- Tinción de contraste: Hematoxilina de Mayer, Hematoxilina Carazzi
- Montaje.
+Resultados: Gangliósidos rojos y Núcleos azules.
*Resumen métodos de identificación de Glicolípidos
