El método de inmunoprecipitación de cromatina puede revelar el estado de acetilación de las histonas en la cromatina.
En un principio las histonas son ligeramente reticuladas al ADN in vivo utilizando un agente químico que forme puentes cruzados, sea reversible y permeable a la célula. Generalmente en los laboratorios es utilizado el formaldehído para este paso debido a que posee las características necesarias.
El proceso propiamente tal, se lleva a cabo en los siguientes pasos:
Paso 1: La cromatina entrelazada es aislada y cortada a una longitud media de dos a tres nucleosomas.
Paso 2: Se añade un anticuerpo contra una determinada secuencia para una histona de cola acetilada, y (paso 3) los nucleosomas unidos son inmunoprecipitados.
Paso 4: El ADN en los fragmentos de cromatina inmunoprecipitada es liberado mediante la inversión de la formación de puentes cruzados y, a continuación se cuantifica mediante el método de PCR sensible.
.JPG)
Los nucleosomas de histonas con colas acetiladas se muestran en verde.
El método puede ser utilizado para analizar la asociación in vivo de cualquier proteína con una secuencia específica de ADN mediante el uso de un anticuerpo contra la proteína de interés en el paso 2.
El método puede ser utilizado para analizar la asociación in vivo de cualquier proteína con una secuencia específica de ADN mediante el uso de un anticuerpo contra la proteína de interés en el paso 2.
Fuente
Lodish et al. Molecular Cell Biology (5ta ed). Cap 11, Pp 469.
Referencia
Rundlett SE et al., 1998, Nature 392:831
