Fuentes / clones
Se utiliza el clon de la Cytokeratin 8, de bajo peso molecular, es el 35βH11. El immunógeno, que se aplica generalmente utilizado para obtener este anticuerpo, es a partir de extractos citoesqueléticos de Hep3B de una línea hepatocelular humana.
Se ha comprobado la especificidad que el monoclonal mouse anti-human Cytokeratin 8, clon 35βH11 (anti-CK8, 35βH11), reacciona con la proteína de 54 kD correspondiente a la citoqueratina 8.
Fijación / Preparación
En cuando a la preparación de las muestras el anticuerpo se puede utilizar en secciones de parafina. El anticuerpo anti-CK8, 35βH11, puede utilizarse en secciones de tejido fijadas con formol e incluidas en parafina. Antes de la tinción en secciones de tejido desparafinadas y rehidratadas, el tejido se deberá someter a un tratamiento previo con enzimas proteolíticas.
Como alternativa, antes del procedimiento de tinción IHQ, las secciones de tejido desparafinadas pueden ser tratadas con calor. La recuperación antigénica supone la inmersión de las secciones de tejido en una solución tampón calentada previamente, manteniendo el calor, en un baño maría (95 a 99°C), un vaporizador (95 a 99°C) o un autoclave (121°C).
En secciones congeladas y preparaciones celulares el anticuerpo anti-CK8, 35βH11, se puede usar para marcar secciones fijadas con metanol o con acetona y congeladas, o en preparaciones celulares fijadas. No se requiere ningún tratamiento previo del tejido.
Este anticuerpo tiene ciertas limitaciones como:
1. La reactividad del anticuerpo anti-CK8, 35βH11 no determina exclusivamente los carcinomas. Raramente, los melanomas y los leiomiosarcomas pueden dar tinción positiva. Por lo general, esta observación es más pronunciada en tejido congelado que en tejido fijado con formol.
2. Se ha comprobado que el sarcoma epitelioide y el sarcoma sinovial muestran una tinción positiva con diversos anticuerpos anticitoqueratina debido a su naturaleza epitelial.
3. Los carcinomas epidermoides cervicales presentan una tinción variable. El epitelio endocervical da una tinción positiva con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11; en cambio, el epitelio escamoso ectocervical no es reactivo con el anti-CK8, 35βH11.
4. Se ha comprobado que las células del retículo extrafolicular de los ganglios linfáticos, amígdalas y bazo reaccionan con los anticuerpos contra la citoqueratina 8.
5. En la amígdala palatina se observó la presencia de algunas células dispersas del epitelio estratificado con una tinción positiva a la citoqueratina 8. Estas células presentaron extensiones pero generalmente fueron más grandes que las células reticulares positivas a la citoqueratina.
6. Cuando se empleó un tratamiento previo proteolítico, se describió la tinción falsa positiva de células gliales y de tumores neurales, en tejido fijado con formol e incluido en parafina. Se ha comprobado, mediante métodos inmunocitoquímicos y bioquímicos, que estas células y tumores no expresan citoqueratina 8. Solo en raras ocasiones, se observó una reactividad en el tejido cerebral cuando se utilizaron algunas enzimas proteolíticas.
7. Una preparación ascítica de anticuerpo anti-CK8, 35βH11 demostró una tinción positiva inesperada e infrecuente de células de músculo liso de miometrio humano normal en tejidos fijados con metanol, congelados, y en tejidos fijados con metacarn e incluidos en parafina.
8. El anticuerpo anti-CK8, 35βH11 no se puede usar como único marcador epitelial en el diagnóstico diferencial de carcinomas de tumores no epiteliales porque no reacciona con tejidos de epitelio escamoso estratificado; se debe usar en un panel de anticuerpos que incluya un marcador para este tipo de epitelio, por ejemplo, anti-citoqueratina, clon 34βE12.
Contexto
Las citoqueratinas son proteínas citoesqueléticas de filamento intermedio que son esenciales para el desarrollo y la diferenciación de las células epiteliales. Se han identificado aproximadamente 20 citoqueratinas diferentes, que están clasificadas y numeradas según sus pesos moleculares y puntos isoeléctricos2.En general, la mayoría de las citoqueratinas de peso molecular más bajo (40 a 54 kD) están distribuidasen el epitelio no escamoso, mientras que las de peso molecular más alto (48 a 67 kD) se encuentranen el epitelio escamoso.
Los anticuerpos monoclonales contra los filamentos intermedios se pueden utilizar para facilitar la subclasificación histológica de las neoplasias humanas. El fenotipo citoesquelético de la mayoría de los tumores se asemeja al de las células normales equivalentes, con independencia del grado de diferenciación. Así pues, estos anticuerpos se pueden utilizar para facilitar el diagnóstico diferencial de tumores anaplásicos de origen desconocido.
El anticuerpo Monoclonal de ratón anti-human Cytokeratin 8, clon 35βH11, está indicado para su uso en el laboratorio, para la identificación cualitativa, mediante microscopía óptica, de la proteína de 54 kD correspondiente a la citoqueratina 8, con el uso de técnicas de prueba inmunohistoquímicas (IHQ). La tinción positiva del tejido neoplásico con anticuerpo anti-citoqueratina 8 indica la presencia de células de origen epitelial. La identificación diferencial se complementa con los resultados de un panel de anticuerpos. La interpretación de los resultados debe realizarla un anatomopatólogo cualificado, teniendo en cuenta el historial clínico del paciente y otras pruebas diagnósticas.
Aplicaciones
En cuanto a la interpretación de la tinción el patrón de tinción celular para el anticuerpo anti-CK8, 35βH11 es citoplasmático difuso.
Las características de resultados en tejidos normales es que entre los tejidos epiteliales no escamosos normales reactivos con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11 se cuentan los siguientes: glándulas y conductos sudoríparos en la piel, neumocitos, epitelio bronquial y mesotelio en el pulmón, epitelios tubulares en el riñón, células acinares y ductales en la mama y el páncreas, epitelio folicular en la glándula tiroides, y epitelios y mesotelio del tubo digestivo. Por lo general, el epitelio escamoso estratificado y los tejidos normales no epiteliales no reaccionan con el anticuerpo anti-CK8, 35βH1113.
Se ha observado la tinción IHQ en la glándula mamaria, el epitelio cilíndrico superficial del colon, intestino delgado y estómago, túbulos distal y proximal del riñón, vías biliares, neumocitos y bronquiolos del pulmón, epitelio superficial del ovario, células acinares y conductos interlobulares del páncreas, paratiroides, próstata, glándulas sudoríparas y glándula tiroides, conductos interlobulares de la glándula salival y endometrio. No se ha observado tinción en las glándulas suprarrenales, médula ósea, encéfalo (cerebro o cerebelo), cuello uterino, corazón, células mesoteliales, pericardio, nervio periférico, hipófisis, músculo esquelético, bazo o testículo. En las pruebas de tejidos humanos normales se observó tinción en el epitelio escamoso no queratinizado de la amígdala palatina.
En tejidos anormales los carcinomas, entre ellos el hepatocelular, endometrial y renal, y también el adenocarcinoma del tubo digestivo, pulmón, ovario, tiroides, glándulas endocrinas, endometrio, riñón, y el carcinoma ductal de la mama y el páncreas mostraron una tinción positiva con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11. Se ha observado que los sarcomas epitelioides y los carcinomas sinoviales muestran una tinción positiva con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11.
Entre los tumores que son negativos al anticuerpo anti-CK8, 35βH11 se cuentan los linfomas, gliomas, melanomas, seminomas y sarcomas. Sin embargo, se ha descrito que las citoqueratinas de bajo peso molecular se han expresado en proporciones de tan sólo 2 de 100 casos de melanomas, 1 de 10 leiomiomas y 8 de 19 leiomiosarcomas. Los hallazgos son más evidentes en tejido congelado y fijado con alcohol que en el tejido fijado con formol.
Shah y cols. sugirieron la utilidad clínica del anticuerpo anti-CK8, 35βH11 para facilitar la diferenciación entre la enfermedad de Paget y la enfermedad de Bowen, y el melanoma pagetoide de diseminación superficial. Se ha descrito la positividad del anticuerpo anti-CK8, 35βH11 en la enfermedad de Paget de la mama (5 de 5) y de la vulva (4 de 4). Sin embargo, ninguno de los 11 casos de enfermedad de Bowen y ninguno de los 6 casos de melanoma pagetoide de diseminación superficial reaccionó con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11.
Referencias
1. Gown AM and Vogel AM. Monoclonal antibodies to intermediate filament proteins of human cells: Unique and cross-reacting antibodies. J Cell Biol 1982; 95:414
2. Moll R, Franke WW, Schiller DL. The catalog of human cytokeratins: Patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982; 31:11
3. Miettinen M. Keratin immunohistochemistry: Update of applications and pitfalls. Pathol Annuals 1993; 28:113 4. Gown AM and Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins III. Analysis of tumors. Amer J Clin Pathol 1985; 84:413
5. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ No. 78-127, Current 13. August 16, 1976
6. Zarbo RJ, Gown AM, Nagel RB, Visscher DW, Crissman JD. Anomalous cytokeratin expression in malignant melanoma: One- and twodimensional Western blot analysis and immunohistochemical survey of 100 melanomas. Mod Pathol 1990; 3:494 7. Brown DC, Theaker JM, Banks PM, Gatter KC, Mason DY. Cytokeratin expression in smooth muscle and smooth muscle tumors. Histopathol 1987; 11:477
8. Swanson PE, Dehner LP, Sirgi KE, Wick MR. Cytokeratin immunoreactivity in malignant tumors of bone and soft tissue. A reappraisal of cytokeratin as a reliable marker in diagnostic immuno-histochemistry. Appl Immunohistochem 1994; 2:103
9. Gown AM and Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins II. Distribution of filaments in normal human tissues. Amer J Pathol 1984; 114:309
10. Franke WW and Moll R. Cytoskeletal components of lymphoid organs. Differentiation 1987; 36:145
11. Bacchi CE, Zarbo RJ, Jiang JJ, Gown AM. Do glioma cells express cytokeratin? Appl Immunohistochem 1995; 3:45
12. Gown AM, Boyd HC, Chang Y, Ferguson M, Reichler B, Tippens D. Smooth muscle cells can express cytokeratins of “simple” epithelium. Immunocytochemical and biochemical studies in vitro and in vivo. Amer J Pathol 1988; 132:223
13. Report of normal tissue immunohistochemical testing using Dako anti-human cytokeratin 8, clone 35βH11. November 1997
14. Shah KD, Tabibzadeh SS, Gerber MA. Immunohistochemical distinction of Paget’s disease from Bowen’s disease and superficial spreading melanoma with the use of monoclonal cytokeratin antibodies. Amer J Clin Pathol 1987; 88:689
http://www.dako.es/prod_downloadpackageinsert.pdf?objectid=110588003
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Se utiliza el clon de la Cytokeratin 8, de bajo peso molecular, es el 35βH11. El immunógeno, que se aplica generalmente utilizado para obtener este anticuerpo, es a partir de extractos citoesqueléticos de Hep3B de una línea hepatocelular humana.
Se ha comprobado la especificidad que el monoclonal mouse anti-human Cytokeratin 8, clon 35βH11 (anti-CK8, 35βH11), reacciona con la proteína de 54 kD correspondiente a la citoqueratina 8.
Fijación / Preparación
En cuando a la preparación de las muestras el anticuerpo se puede utilizar en secciones de parafina. El anticuerpo anti-CK8, 35βH11, puede utilizarse en secciones de tejido fijadas con formol e incluidas en parafina. Antes de la tinción en secciones de tejido desparafinadas y rehidratadas, el tejido se deberá someter a un tratamiento previo con enzimas proteolíticas.
Como alternativa, antes del procedimiento de tinción IHQ, las secciones de tejido desparafinadas pueden ser tratadas con calor. La recuperación antigénica supone la inmersión de las secciones de tejido en una solución tampón calentada previamente, manteniendo el calor, en un baño maría (95 a 99°C), un vaporizador (95 a 99°C) o un autoclave (121°C).
En secciones congeladas y preparaciones celulares el anticuerpo anti-CK8, 35βH11, se puede usar para marcar secciones fijadas con metanol o con acetona y congeladas, o en preparaciones celulares fijadas. No se requiere ningún tratamiento previo del tejido.
Este anticuerpo tiene ciertas limitaciones como:
1. La reactividad del anticuerpo anti-CK8, 35βH11 no determina exclusivamente los carcinomas. Raramente, los melanomas y los leiomiosarcomas pueden dar tinción positiva. Por lo general, esta observación es más pronunciada en tejido congelado que en tejido fijado con formol.
2. Se ha comprobado que el sarcoma epitelioide y el sarcoma sinovial muestran una tinción positiva con diversos anticuerpos anticitoqueratina debido a su naturaleza epitelial.
3. Los carcinomas epidermoides cervicales presentan una tinción variable. El epitelio endocervical da una tinción positiva con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11; en cambio, el epitelio escamoso ectocervical no es reactivo con el anti-CK8, 35βH11.
4. Se ha comprobado que las células del retículo extrafolicular de los ganglios linfáticos, amígdalas y bazo reaccionan con los anticuerpos contra la citoqueratina 8.
5. En la amígdala palatina se observó la presencia de algunas células dispersas del epitelio estratificado con una tinción positiva a la citoqueratina 8. Estas células presentaron extensiones pero generalmente fueron más grandes que las células reticulares positivas a la citoqueratina.
6. Cuando se empleó un tratamiento previo proteolítico, se describió la tinción falsa positiva de células gliales y de tumores neurales, en tejido fijado con formol e incluido en parafina. Se ha comprobado, mediante métodos inmunocitoquímicos y bioquímicos, que estas células y tumores no expresan citoqueratina 8. Solo en raras ocasiones, se observó una reactividad en el tejido cerebral cuando se utilizaron algunas enzimas proteolíticas.
7. Una preparación ascítica de anticuerpo anti-CK8, 35βH11 demostró una tinción positiva inesperada e infrecuente de células de músculo liso de miometrio humano normal en tejidos fijados con metanol, congelados, y en tejidos fijados con metacarn e incluidos en parafina.
8. El anticuerpo anti-CK8, 35βH11 no se puede usar como único marcador epitelial en el diagnóstico diferencial de carcinomas de tumores no epiteliales porque no reacciona con tejidos de epitelio escamoso estratificado; se debe usar en un panel de anticuerpos que incluya un marcador para este tipo de epitelio, por ejemplo, anti-citoqueratina, clon 34βE12.
Contexto
Las citoqueratinas son proteínas citoesqueléticas de filamento intermedio que son esenciales para el desarrollo y la diferenciación de las células epiteliales. Se han identificado aproximadamente 20 citoqueratinas diferentes, que están clasificadas y numeradas según sus pesos moleculares y puntos isoeléctricos2.En general, la mayoría de las citoqueratinas de peso molecular más bajo (40 a 54 kD) están distribuidasen el epitelio no escamoso, mientras que las de peso molecular más alto (48 a 67 kD) se encuentranen el epitelio escamoso.
Los anticuerpos monoclonales contra los filamentos intermedios se pueden utilizar para facilitar la subclasificación histológica de las neoplasias humanas. El fenotipo citoesquelético de la mayoría de los tumores se asemeja al de las células normales equivalentes, con independencia del grado de diferenciación. Así pues, estos anticuerpos se pueden utilizar para facilitar el diagnóstico diferencial de tumores anaplásicos de origen desconocido.
El anticuerpo Monoclonal de ratón anti-human Cytokeratin 8, clon 35βH11, está indicado para su uso en el laboratorio, para la identificación cualitativa, mediante microscopía óptica, de la proteína de 54 kD correspondiente a la citoqueratina 8, con el uso de técnicas de prueba inmunohistoquímicas (IHQ). La tinción positiva del tejido neoplásico con anticuerpo anti-citoqueratina 8 indica la presencia de células de origen epitelial. La identificación diferencial se complementa con los resultados de un panel de anticuerpos. La interpretación de los resultados debe realizarla un anatomopatólogo cualificado, teniendo en cuenta el historial clínico del paciente y otras pruebas diagnósticas.
Aplicaciones
En cuanto a la interpretación de la tinción el patrón de tinción celular para el anticuerpo anti-CK8, 35βH11 es citoplasmático difuso.
Las características de resultados en tejidos normales es que entre los tejidos epiteliales no escamosos normales reactivos con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11 se cuentan los siguientes: glándulas y conductos sudoríparos en la piel, neumocitos, epitelio bronquial y mesotelio en el pulmón, epitelios tubulares en el riñón, células acinares y ductales en la mama y el páncreas, epitelio folicular en la glándula tiroides, y epitelios y mesotelio del tubo digestivo. Por lo general, el epitelio escamoso estratificado y los tejidos normales no epiteliales no reaccionan con el anticuerpo anti-CK8, 35βH1113.
Se ha observado la tinción IHQ en la glándula mamaria, el epitelio cilíndrico superficial del colon, intestino delgado y estómago, túbulos distal y proximal del riñón, vías biliares, neumocitos y bronquiolos del pulmón, epitelio superficial del ovario, células acinares y conductos interlobulares del páncreas, paratiroides, próstata, glándulas sudoríparas y glándula tiroides, conductos interlobulares de la glándula salival y endometrio. No se ha observado tinción en las glándulas suprarrenales, médula ósea, encéfalo (cerebro o cerebelo), cuello uterino, corazón, células mesoteliales, pericardio, nervio periférico, hipófisis, músculo esquelético, bazo o testículo. En las pruebas de tejidos humanos normales se observó tinción en el epitelio escamoso no queratinizado de la amígdala palatina.
En tejidos anormales los carcinomas, entre ellos el hepatocelular, endometrial y renal, y también el adenocarcinoma del tubo digestivo, pulmón, ovario, tiroides, glándulas endocrinas, endometrio, riñón, y el carcinoma ductal de la mama y el páncreas mostraron una tinción positiva con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11. Se ha observado que los sarcomas epitelioides y los carcinomas sinoviales muestran una tinción positiva con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11.
Entre los tumores que son negativos al anticuerpo anti-CK8, 35βH11 se cuentan los linfomas, gliomas, melanomas, seminomas y sarcomas. Sin embargo, se ha descrito que las citoqueratinas de bajo peso molecular se han expresado en proporciones de tan sólo 2 de 100 casos de melanomas, 1 de 10 leiomiomas y 8 de 19 leiomiosarcomas. Los hallazgos son más evidentes en tejido congelado y fijado con alcohol que en el tejido fijado con formol.
Shah y cols. sugirieron la utilidad clínica del anticuerpo anti-CK8, 35βH11 para facilitar la diferenciación entre la enfermedad de Paget y la enfermedad de Bowen, y el melanoma pagetoide de diseminación superficial. Se ha descrito la positividad del anticuerpo anti-CK8, 35βH11 en la enfermedad de Paget de la mama (5 de 5) y de la vulva (4 de 4). Sin embargo, ninguno de los 11 casos de enfermedad de Bowen y ninguno de los 6 casos de melanoma pagetoide de diseminación superficial reaccionó con el anticuerpo anti-CK8, 35βH11.
Referencias
1. Gown AM and Vogel AM. Monoclonal antibodies to intermediate filament proteins of human cells: Unique and cross-reacting antibodies. J Cell Biol 1982; 95:414
2. Moll R, Franke WW, Schiller DL. The catalog of human cytokeratins: Patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982; 31:11
3. Miettinen M. Keratin immunohistochemistry: Update of applications and pitfalls. Pathol Annuals 1993; 28:113 4. Gown AM and Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins III. Analysis of tumors. Amer J Clin Pathol 1985; 84:413
5. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ No. 78-127, Current 13. August 16, 1976
6. Zarbo RJ, Gown AM, Nagel RB, Visscher DW, Crissman JD. Anomalous cytokeratin expression in malignant melanoma: One- and twodimensional Western blot analysis and immunohistochemical survey of 100 melanomas. Mod Pathol 1990; 3:494 7. Brown DC, Theaker JM, Banks PM, Gatter KC, Mason DY. Cytokeratin expression in smooth muscle and smooth muscle tumors. Histopathol 1987; 11:477
8. Swanson PE, Dehner LP, Sirgi KE, Wick MR. Cytokeratin immunoreactivity in malignant tumors of bone and soft tissue. A reappraisal of cytokeratin as a reliable marker in diagnostic immuno-histochemistry. Appl Immunohistochem 1994; 2:103
9. Gown AM and Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins II. Distribution of filaments in normal human tissues. Amer J Pathol 1984; 114:309
10. Franke WW and Moll R. Cytoskeletal components of lymphoid organs. Differentiation 1987; 36:145
11. Bacchi CE, Zarbo RJ, Jiang JJ, Gown AM. Do glioma cells express cytokeratin? Appl Immunohistochem 1995; 3:45
12. Gown AM, Boyd HC, Chang Y, Ferguson M, Reichler B, Tippens D. Smooth muscle cells can express cytokeratins of “simple” epithelium. Immunocytochemical and biochemical studies in vitro and in vivo. Amer J Pathol 1988; 132:223
13. Report of normal tissue immunohistochemical testing using Dako anti-human cytokeratin 8, clone 35βH11. November 1997
14. Shah KD, Tabibzadeh SS, Gerber MA. Immunohistochemical distinction of Paget’s disease from Bowen’s disease and superficial spreading melanoma with the use of monoclonal cytokeratin antibodies. Amer J Clin Pathol 1987; 88:689
http://www.dako.es/prod_downloadpackageinsert.pdf?objectid=110588003
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