La esfingomielina es un fosfolípido que contiene una amida derivada de la esfingosina, una colina y ácidos grasos. Las uniones amidas de la esfingomielina son mas resistentes a la hidrólisis alcalina que las uniones esteres de los fosfolípidos.
*Método Hemateína ácida-Dicromato (DAH)
El principio de cromación fue introducido por Muller (1859), pero Weigert observó que la mielina tiene una gran afinidad por la hematoxilina después de ser tratada con fijadores que contienen cromato. Beker (1946) observó que los métodos de cromación y tinción con hemateína ácida son razonablemente específicos para fosfolípidos que contienen colina o, de acuerdo a Roozemond (1971), por lípidos polares que están en un estado fisicoquímica particular. Interferencia de proteínas pueden ser descartadas por comparación con controles de extracción de lípidos con piridina.
Los cortes por congelación son directamente cromados, y luego tratados con hemateína ácida (hematoxilina, iodato de sodio y ácido acético glacial), obteniéndose un complejo metal-colorante con el cromo de color azul oscuro. Esta técnica ha sido utilizada en combinación con aceite rojo O o sudan rojo, para la demostración de lípidos neutros y fosfolípidos en una misma preparación.
En primera instancia, los cortes son expuestos a una solución de cloruro de calcio y dicromato de calcio, este último probablemente se une covalentemente con enlaces insaturados y con la colina, además reacciona también con grupos hidroxilos adyacentes.
Se podría esperar que los grupos hidroxilos libres del complejo participase en la formación de complejos colorante-metal si el numero de coordinación de la tomo de cromo fuese 6.
*Método Hematoxilina férrica (FeH): Una versión del principio de hematoxilina-metal fue introducido por Elleder & Lojda (1973). Rápida y aparentemente más sensible que la técnica de DAH.
+Método para Esfingomielina
*Método de Hidróxido de sodio-Hematoxilina Férrica/DAH
El mismo método utilizado para fosfolípidos que contiene colina pueden ser empleados específicamente para identificación de esfingomielina. Para ello se debe incubar previamente el tejido en una solución de hidróxido de sodio, para destruir los fosfoglicéridos, dejando intactos los fosfoesfingósidos (esfingomielina), resistentes a la hidrólisis alcalina.
*Método Hemateína ácida-Dicromato (DAH)
El principio de cromación fue introducido por Muller (1859), pero Weigert observó que la mielina tiene una gran afinidad por la hematoxilina después de ser tratada con fijadores que contienen cromato. Beker (1946) observó que los métodos de cromación y tinción con hemateína ácida son razonablemente específicos para fosfolípidos que contienen colina o, de acuerdo a Roozemond (1971), por lípidos polares que están en un estado fisicoquímica particular. Interferencia de proteínas pueden ser descartadas por comparación con controles de extracción de lípidos con piridina.
Los cortes por congelación son directamente cromados, y luego tratados con hemateína ácida (hematoxilina, iodato de sodio y ácido acético glacial), obteniéndose un complejo metal-colorante con el cromo de color azul oscuro. Esta técnica ha sido utilizada en combinación con aceite rojo O o sudan rojo, para la demostración de lípidos neutros y fosfolípidos en una misma preparación.
En primera instancia, los cortes son expuestos a una solución de cloruro de calcio y dicromato de calcio, este último probablemente se une covalentemente con enlaces insaturados y con la colina, además reacciona también con grupos hidroxilos adyacentes.
Se podría esperar que los grupos hidroxilos libres del complejo participase en la formación de complejos colorante-metal si el numero de coordinación de la tomo de cromo fuese 6.
*Método Hematoxilina férrica (FeH): Una versión del principio de hematoxilina-metal fue introducido por Elleder & Lojda (1973). Rápida y aparentemente más sensible que la técnica de DAH.
+Método para Esfingomielina
*Método de Hidróxido de sodio-Hematoxilina Férrica/DAH
El mismo método utilizado para fosfolípidos que contiene colina pueden ser empleados específicamente para identificación de esfingomielina. Para ello se debe incubar previamente el tejido en una solución de hidróxido de sodio, para destruir los fosfoglicéridos, dejando intactos los fosfoesfingósidos (esfingomielina), resistentes a la hidrólisis alcalina.
