+ Método panóptico de Papenhein
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) May Grunwald diluida al 20% diluida en Agua destilada
b) Giemsa diluida (8,3 mL en 100 mL de Agua destilada)
c) Agua Acetificada (Agua destilada [100 mL] + Acido acético [5 gotas])
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra se coloco en May Grunwald diluida (Sol. a) durante 15 minutos en estufa a 37°C, después sin lavar se tiñó durante 40 minutos a 37°C en Giemsa diluida (Sol. b) y se diferencio en Agua Acetificada (Sol. c). Se lavo en agua destilada, deshidrato en alcohol isopropílico o alcohol acetona (en partes igual) por dos baños, aclaro con Xilol y monto con resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son linfocitos con núcleos azules y citoplasma azul pálido, trombocitos azul pálido, monocitos con núcleos azul violeta y citoplasma azul grisáceo, granulocitos con núcleos azul violeta, y granulaciones citoplasmáticas rojo, azul o violeta.
+ Método de Giemsa para cortes
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) Solución de Giemsa filtrada (20 mL) + Agua destilada (80 mL)
b) Agua acetificada: Agua destilada (100 mL) + Acido acético (5 gotas)
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra, se desenkeriza, se tiñe en Sol. a) en un coplin por 1 hora y después rápidamente se pasan los cortes por Agua acetificada. Rápidamente se diferencian los cortes en Alcohol 95% controlando al microscopio, se deshidratan en Alcohol isopropílico o que se seque al aire y se montan en resina sintética sin pasar por Xilol.
- Los resultados esperados para este método es encontrar que la granulación esosinófila no presenta la tonalidad rojo-anaranjada característica. Las granulaciones neutrófilas y los hematíes se tiñen inadecuadamente, sin embargo, esta coloración permite diferenciar alguna forma de metamielocito que pueden ser confundidos con los monocitos, pues el protoplasma de los monocitos queda de color azulado y el de los metamielocitos de color rosa.
+ Método de Maygrunwald-Giemsa para frotis sanguíneo
Es un tipo de tinción panóptica que se utiliza para el estudio de tejido sanguíneo en frotis. Se utilizan dos tinciones neutras donde la primera consiste en la combinación de los colorantes Eosina (acida) y Azul de Metileno (básica) llamada May Grünwald y la segunda por compuesta por una mezcla de Azur B (básica) y Eosinato (ácida) llamada Giemsa.
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Fijación del extendido: Se deja caer unas gotas de metanol hasta que se evapore y se gotea colorante May-Grünwaldty durante 5 minutos.
Enjuague con agua: se lava con agua destilada o tampón fosfato pH 6,4.
Tinción con Giemsa: Se utiliza el colorante de Giemsa con una dilución 1:10 (1 ml del colorante en 10 ml de agua), se cubre completamente el extendido y deja en contacto durante 15 a 20 min. Finalmente se hace un enjuague rápido en agua y se deja secar al aire, se pasan por Xilol y se montan en resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son eritrocitos rosa pálido, gránulos eosinófilos rojos y núcleos de diversos grados de lila o púrpura.
*Manual de Laboratorio de Técnica Histológica (Guía de trabajos y datos útiles para el alumno), Profesor Marco Antonio Loyola Brambilla, Mención de Morfofisiopatología y Citodiagnóstico, Carrera Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción.
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) May Grunwald diluida al 20% diluida en Agua destilada
b) Giemsa diluida (8,3 mL en 100 mL de Agua destilada)
c) Agua Acetificada (Agua destilada [100 mL] + Acido acético [5 gotas])
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra se coloco en May Grunwald diluida (Sol. a) durante 15 minutos en estufa a 37°C, después sin lavar se tiñó durante 40 minutos a 37°C en Giemsa diluida (Sol. b) y se diferencio en Agua Acetificada (Sol. c). Se lavo en agua destilada, deshidrato en alcohol isopropílico o alcohol acetona (en partes igual) por dos baños, aclaro con Xilol y monto con resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son linfocitos con núcleos azules y citoplasma azul pálido, trombocitos azul pálido, monocitos con núcleos azul violeta y citoplasma azul grisáceo, granulocitos con núcleos azul violeta, y granulaciones citoplasmáticas rojo, azul o violeta.
+ Método de Giemsa para cortes
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) Solución de Giemsa filtrada (20 mL) + Agua destilada (80 mL)
b) Agua acetificada: Agua destilada (100 mL) + Acido acético (5 gotas)
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra, se desenkeriza, se tiñe en Sol. a) en un coplin por 1 hora y después rápidamente se pasan los cortes por Agua acetificada. Rápidamente se diferencian los cortes en Alcohol 95% controlando al microscopio, se deshidratan en Alcohol isopropílico o que se seque al aire y se montan en resina sintética sin pasar por Xilol.
- Los resultados esperados para este método es encontrar que la granulación esosinófila no presenta la tonalidad rojo-anaranjada característica. Las granulaciones neutrófilas y los hematíes se tiñen inadecuadamente, sin embargo, esta coloración permite diferenciar alguna forma de metamielocito que pueden ser confundidos con los monocitos, pues el protoplasma de los monocitos queda de color azulado y el de los metamielocitos de color rosa.
+ Método de Maygrunwald-Giemsa para frotis sanguíneo
Es un tipo de tinción panóptica que se utiliza para el estudio de tejido sanguíneo en frotis. Se utilizan dos tinciones neutras donde la primera consiste en la combinación de los colorantes Eosina (acida) y Azul de Metileno (básica) llamada May Grünwald y la segunda por compuesta por una mezcla de Azur B (básica) y Eosinato (ácida) llamada Giemsa.
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Fijación del extendido: Se deja caer unas gotas de metanol hasta que se evapore y se gotea colorante May-Grünwaldty durante 5 minutos.
Enjuague con agua: se lava con agua destilada o tampón fosfato pH 6,4.
Tinción con Giemsa: Se utiliza el colorante de Giemsa con una dilución 1:10 (1 ml del colorante en 10 ml de agua), se cubre completamente el extendido y deja en contacto durante 15 a 20 min. Finalmente se hace un enjuague rápido en agua y se deja secar al aire, se pasan por Xilol y se montan en resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son eritrocitos rosa pálido, gránulos eosinófilos rojos y núcleos de diversos grados de lila o púrpura.
*Manual de Laboratorio de Técnica Histológica (Guía de trabajos y datos útiles para el alumno), Profesor Marco Antonio Loyola Brambilla, Mención de Morfofisiopatología y Citodiagnóstico, Carrera Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción.
