La siguiente tabla indica los pesos moleculares y el valor del punto isoeléctrico de varias proteínas a las que se hace referencia en los problesmas de esta sección.
Problema 1.- La siguiente lista de reactivos incluye muchos compuestos que se emplean normalmente para investigar la estructura y propiedades de las proteínas:
CNBr / Azul de Coomasie / 6N.HCl @ 90°C / b-mercaptoetanol / Ninhidrina / Tripsina / Fenilisotiocianato / Quimotripsina / dodecil sulfato (SDS) / Bisacrilamida / Iodoacetamida o ácido perfórmico
Elija de esta lista los reactivos que emplearía en los siguientes casos y diga cómo emplearía cada uno de ellos para dicho propósito.
a) Se desea determinar el peso molecular de las subunidades de una proteína mediante un técnica electroforética.
b) Se desea cortar una proteína en fragmentos pequeños para poder estudiarla.
c) Se desea degradar una polipéptido de la proteína en sus componentes aminoacídicos para luego analizar la proporción que la cadena estudiada contiene de cada uno de ellos.
d) Se desea obtener la secuencia de aminoácidos de uno de los péptidos obtenidos a partir de la digestión de una proteína.
Problema 2.- En una electroforesis desnaturalizante (según Laemmli) se obtuvieron las movilidades relativas siguientes:
Ovoalbúmina, 0.39; b-lactoalbúmina, 0.46; Mioglobina, 0.66; Lisozima, 0.58.
De acuerdo con los datos de la tabla 1 calcule el peso molecular de la lisozima.
Problema 3.-Un investigador estaba tratando de purificar la acetilcolinesterasa de cerebro de rata por medio de diversas técnicas. Él reportó sus datos en la siguiente tabla pero omitió calcular algunos valores útiles.
a) Complete la tabla agregando las columna de actividad específica y el rendimiento obtenido luego de cada paso de la purificación.
b) Analize los resultados de la tabla y, tomando en cuenta aquellos pasos que no contribuyeron a la purificación, sugiera mejoras al procedimiento.
c) explique el razonamiento que apoya sus propuestas.
Problema 4.- A que pH sería más eficaz una electroforesis nativa (sin desnaturalizantes) de las siguientes mezclas de proteínas: a) Seroalbúmina y Hemoglobina; b) mioglobina y quimotripsinógeno; c) ovoalbúmina, seroalbúmina y ureasa (ver tabla 1).
Problema 5.- Prediga la secuencia con la eluirían las siguientes proteínas de una columna de filtración en gel con un rango de exclusión de 5,000 a 400,000 daltones: Mioglobina, catalasa, citocromo c, miosina, quimotripsinógeno y seroalbúmina (ver tabla 1).
Problema 6.- Calcule el peso molecular aproximado de la lisozima nativa a partir de los siguientes volumenes de elución obtenidos en la columna del problema anterior (ver tabla 1):
Citocromo c, 118; b-lactoalbúmina, 58; Hemoglobina, 24; Lisozima, 83 ml.
Problema 7.- Con los datos de los problemas 2 y 7 ¿Qué puede decir acerca de la estructura cuaternaria de la lizozima? - Explique su respuesta.
FUENTE: http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/webprobs/main.html
Respuestas: http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/webprobs/solucion.html
Problema 1.- La siguiente lista de reactivos incluye muchos compuestos que se emplean normalmente para investigar la estructura y propiedades de las proteínas:CNBr / Azul de Coomasie / 6N.HCl @ 90°C / b-mercaptoetanol / Ninhidrina / Tripsina / Fenilisotiocianato / Quimotripsina / dodecil sulfato (SDS) / Bisacrilamida / Iodoacetamida o ácido perfórmico
Elija de esta lista los reactivos que emplearía en los siguientes casos y diga cómo emplearía cada uno de ellos para dicho propósito.
a) Se desea determinar el peso molecular de las subunidades de una proteína mediante un técnica electroforética.
b) Se desea cortar una proteína en fragmentos pequeños para poder estudiarla.
c) Se desea degradar una polipéptido de la proteína en sus componentes aminoacídicos para luego analizar la proporción que la cadena estudiada contiene de cada uno de ellos.
d) Se desea obtener la secuencia de aminoácidos de uno de los péptidos obtenidos a partir de la digestión de una proteína.
Problema 2.- En una electroforesis desnaturalizante (según Laemmli) se obtuvieron las movilidades relativas siguientes:
Ovoalbúmina, 0.39; b-lactoalbúmina, 0.46; Mioglobina, 0.66; Lisozima, 0.58.
De acuerdo con los datos de la tabla 1 calcule el peso molecular de la lisozima.
Problema 3.-Un investigador estaba tratando de purificar la acetilcolinesterasa de cerebro de rata por medio de diversas técnicas. Él reportó sus datos en la siguiente tabla pero omitió calcular algunos valores útiles.
a) Complete la tabla agregando las columna de actividad específica y el rendimiento obtenido luego de cada paso de la purificación.b) Analize los resultados de la tabla y, tomando en cuenta aquellos pasos que no contribuyeron a la purificación, sugiera mejoras al procedimiento.
c) explique el razonamiento que apoya sus propuestas.
Problema 4.- A que pH sería más eficaz una electroforesis nativa (sin desnaturalizantes) de las siguientes mezclas de proteínas: a) Seroalbúmina y Hemoglobina; b) mioglobina y quimotripsinógeno; c) ovoalbúmina, seroalbúmina y ureasa (ver tabla 1).
Problema 5.- Prediga la secuencia con la eluirían las siguientes proteínas de una columna de filtración en gel con un rango de exclusión de 5,000 a 400,000 daltones: Mioglobina, catalasa, citocromo c, miosina, quimotripsinógeno y seroalbúmina (ver tabla 1).
Problema 6.- Calcule el peso molecular aproximado de la lisozima nativa a partir de los siguientes volumenes de elución obtenidos en la columna del problema anterior (ver tabla 1):
Citocromo c, 118; b-lactoalbúmina, 58; Hemoglobina, 24; Lisozima, 83 ml.
Problema 7.- Con los datos de los problemas 2 y 7 ¿Qué puede decir acerca de la estructura cuaternaria de la lizozima? - Explique su respuesta.
FUENTE: http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/webprobs/main.html
Respuestas: http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/webprobs/solucion.html
