Lavado: Las muestras una vez retiradas del fijador tienen que pasar por un proceso de lavado en donde se retira el exceso de fijador, de manera que después se puede hacer una inclusión sin interferencia por parte del fijador. El Formaldehído y el Líquido de Bouin son lavados con alcohol 70% y el Líquido de Zenker es lavado con agua destilada.
Desenquerización (desenkerización): Es un proceso indispensable para poder eliminar los cristales de bicloruro de Hg (HgCl2) que producen los fijadores en base a mercurio (Zenker), y se puede llevar a cabo después de que la muestra es fijada o después de que es desparafinada. Para lograr esto se pasa la muestra por Lugol o Alcohol Yodado por 10 minutos, se lava en agua destilada, se deja en Hiposulfito de Sodio (Na2SO2) al 0,25% hasta que pierda el color amarillo del yodo y finalmente se lava en abundante agua destilada.
Descalcificación
El objetivo de la descalcificación es remover los iones de calcio de las partes óseas del espécimen sin dañar otros componentes para facilitar el corte en secciones. El prerrequisito más importante para lograr una descalcificación satisfactoria es que el tejido tiene que ser fijado antes de exponerlo al líquido descalcificante.
Como el esqueleto celular es de naturaleza proteica, la fijación va dirigida fundamentalmente a la estabilización de proteínas para lo que se utiliza formol o formalina pura (25 mL formalina pura) en solución (350 mL de agua destilada) concentrada de aldehído fórmico al 40%.
La descalcificación con acido fórmico (125 mL concentrado) es la mas rápida pero también una de las mas agresivas debido a que el pH es bajo, daña mucho al tejido, células y proteínas debido a que no resisten un medio tan acido y se destruyen.
+ Métodos ácidos de descalcificación
*Los ácidos, aunque tamponados, tienen efectos estabilizadores sobre el tejido.
*Produce fuerte basofilia nuclear.
*La mayor solubilización de las sales de calcio es a pH 4,5 y las soluciones ácidas tienen un pH entre 0,5-3,0.
*Acido fórmico no produce perdida de la habilidad de tinción.
*Mezcla de formaldehído con ácido fórmico fija y descalcifica.
*Los iones de calcio migran del tejido a la solución.
*Las resinas de intercambio iónico además del ácido fórmico tienen una capa de sal amoniacal de una resina sulfatada. Los iones de amonio de NH4+ de la resina se intercambian con los iones de Ca+2 manteniendo la solución libre de iones Calcio acelerando la reacción.
*En el método electrolítico se mezcla ácido fórmico y ácido clorhídrico, y el hueso se ubica al anodo (+) y se desplazan hacia el cátodo (-).
Agentes quelantes
*Son compuestos orgánicos que tienen la propiedad de unirse con los iones de calcio, como es el EDTA.
*Punto de final de descalcificación
- Método mecánico: mide el grado de descalcificación del hueso por la flexibilidad del tejido al doblarlo en forma manual.
- Método químico: depende de la precipitación de oxalato de calcio, cuando una solución descalcificante se mezcla con una solución con hidroxido de amonio y oxalato de amonio. La solución turbia demuestra presencia de oxalato de calcio.
- Radiografía: se observa la mineralización del tejido.
Desenquerización (desenkerización): Es un proceso indispensable para poder eliminar los cristales de bicloruro de Hg (HgCl2) que producen los fijadores en base a mercurio (Zenker), y se puede llevar a cabo después de que la muestra es fijada o después de que es desparafinada. Para lograr esto se pasa la muestra por Lugol o Alcohol Yodado por 10 minutos, se lava en agua destilada, se deja en Hiposulfito de Sodio (Na2SO2) al 0,25% hasta que pierda el color amarillo del yodo y finalmente se lava en abundante agua destilada.
Descalcificación
El objetivo de la descalcificación es remover los iones de calcio de las partes óseas del espécimen sin dañar otros componentes para facilitar el corte en secciones. El prerrequisito más importante para lograr una descalcificación satisfactoria es que el tejido tiene que ser fijado antes de exponerlo al líquido descalcificante.
Como el esqueleto celular es de naturaleza proteica, la fijación va dirigida fundamentalmente a la estabilización de proteínas para lo que se utiliza formol o formalina pura (25 mL formalina pura) en solución (350 mL de agua destilada) concentrada de aldehído fórmico al 40%.
La descalcificación con acido fórmico (125 mL concentrado) es la mas rápida pero también una de las mas agresivas debido a que el pH es bajo, daña mucho al tejido, células y proteínas debido a que no resisten un medio tan acido y se destruyen.
+ Métodos ácidos de descalcificación
*Los ácidos, aunque tamponados, tienen efectos estabilizadores sobre el tejido.
*Produce fuerte basofilia nuclear.
*La mayor solubilización de las sales de calcio es a pH 4,5 y las soluciones ácidas tienen un pH entre 0,5-3,0.
*Acido fórmico no produce perdida de la habilidad de tinción.
*Mezcla de formaldehído con ácido fórmico fija y descalcifica.
*Los iones de calcio migran del tejido a la solución.
*Las resinas de intercambio iónico además del ácido fórmico tienen una capa de sal amoniacal de una resina sulfatada. Los iones de amonio de NH4+ de la resina se intercambian con los iones de Ca+2 manteniendo la solución libre de iones Calcio acelerando la reacción.
*En el método electrolítico se mezcla ácido fórmico y ácido clorhídrico, y el hueso se ubica al anodo (+) y se desplazan hacia el cátodo (-).
Agentes quelantes
*Son compuestos orgánicos que tienen la propiedad de unirse con los iones de calcio, como es el EDTA.
*Punto de final de descalcificación
- Método mecánico: mide el grado de descalcificación del hueso por la flexibilidad del tejido al doblarlo en forma manual.
- Método químico: depende de la precipitación de oxalato de calcio, cuando una solución descalcificante se mezcla con una solución con hidroxido de amonio y oxalato de amonio. La solución turbia demuestra presencia de oxalato de calcio.
- Radiografía: se observa la mineralización del tejido.
