+ Método de Van Gieson (tricrómica de un paso)
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) Solución de Picro-Ponceau: Ponceau S al 1% (10 mL) + Acido acético glacial (5mL) + Solución acuosa saturada de Acido pícrico (90 mL).
b) Hematoxilina férrica de Weigert: Solución A formada por Hematoxilina cristalizada (1 gr) + Alcohol 100% (100 mL) y Solución B formada por Cloruro férrico 29% (4 mL) + Agua destilada (95 mL) + Acido clorhídrico concentrado (1 mL); mezcladas la Sol. A y Sol. B en proporción de 1 : 1.
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra se realizo la tinción con Hematoxilina férrica de Weigert (Sol. b) durante 10 minutos, se lavaron con abundante agua corriente hasta que los núcleos se observaron nítidamente negros y se pasaron por agua destilada. Luego se tiñeron en la solución de Van Gieson o Picro-Ponceau (Sol. a) durante 1-2 minutos, se colocaron directamente en alcohol 95%, se deshidrataron en alcohol absoluto, aclararon en Xilol y montaron en resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son fibras colágenas rojas; núcleos de azul a negros; fibras musculares amarillas; y citoplasma amarillo.
+ Método de Masson (tricrómica de paso múltiple)
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) Hematoxilina férrica de Weigert: Solución A formada por Hematoxilina cristalizada (1 gr) + Alcohol 100% (100 mL) y Solución B formada por Cloruro férrico 29% (4 mL) + Agua destilada (95 mL) + Acido clorhídrico concentrado (1 mL); mezcladas la Sol. A y Sol. B en proporción de 1 : 1.
b) Solución de Biebrich Scarlett- Fucsina ácida: Biebrich Scarlett 1% en solución acuosa (90 mL) + Fucsina ácida 1% en solución acuosa (10 mL) + Acido acético glacial (1 mL).
c) Solución acido fosfomolíbdico-fosfotúngstico: Acido fosfomolíbdico (5 gr) + Acido fosfotúngstico (5 gr) + Agua destilada 200 mL.
d) Solución de Azul de Anilina: Azul de anilina soluble en agua (2,5 gr) + Acido acético glacial (2 mL) + Agua destilada (100 mL).
e) Solución de acido acético glacial al 1%
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra se realizo una tinción con Hematoxilina férrica de Weigert (Sol. a) durante 10 minutos, se lavaron con abundante agua corriente hasta que los núcleos se observaron nítidamente negros y se pasaron por agua destilada. Luego se tiñeron en solución de Biebrich Scarlett-Fucsina acida durante 2 minutos, se lavo en agua destilada en un paso rápido y se coloco en la Solución acido fosfomolíbdico-fosfotúngstico (Sol. c) durante 15 minutos y se lavo rápidamente en agua destilada.
Después se tiñeron en Solución de Azul de Anilina (Sol. d) durante 5 minutos, se lavaron con agua destilada y se colocaron en una Solución de acido acético glacial al 1% (Sol. e) durante 3-4 minutos. Finalmente se deshidrataron en alcohol 95%, luego en alcohol absoluto, aclararon en Xilol y montaron en resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son núcleos negros; citoplasma, queratina y fibras musculares rojas; y fibras colágenas azules.
*Manual de Laboratorio de Técnica Histológica (Guía de trabajos y datos útiles para el alumno), Profesor Marco Antonio Loyola Brambilla, Mención de Morfofisiopatología y Citodiagnóstico, Carrera Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción.
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) Solución de Picro-Ponceau: Ponceau S al 1% (10 mL) + Acido acético glacial (5mL) + Solución acuosa saturada de Acido pícrico (90 mL).
b) Hematoxilina férrica de Weigert: Solución A formada por Hematoxilina cristalizada (1 gr) + Alcohol 100% (100 mL) y Solución B formada por Cloruro férrico 29% (4 mL) + Agua destilada (95 mL) + Acido clorhídrico concentrado (1 mL); mezcladas la Sol. A y Sol. B en proporción de 1 : 1.
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra se realizo la tinción con Hematoxilina férrica de Weigert (Sol. b) durante 10 minutos, se lavaron con abundante agua corriente hasta que los núcleos se observaron nítidamente negros y se pasaron por agua destilada. Luego se tiñeron en la solución de Van Gieson o Picro-Ponceau (Sol. a) durante 1-2 minutos, se colocaron directamente en alcohol 95%, se deshidrataron en alcohol absoluto, aclararon en Xilol y montaron en resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son fibras colágenas rojas; núcleos de azul a negros; fibras musculares amarillas; y citoplasma amarillo.
+ Método de Masson (tricrómica de paso múltiple)
- Para este método se utilizan los reactivos:
a) Hematoxilina férrica de Weigert: Solución A formada por Hematoxilina cristalizada (1 gr) + Alcohol 100% (100 mL) y Solución B formada por Cloruro férrico 29% (4 mL) + Agua destilada (95 mL) + Acido clorhídrico concentrado (1 mL); mezcladas la Sol. A y Sol. B en proporción de 1 : 1.
b) Solución de Biebrich Scarlett- Fucsina ácida: Biebrich Scarlett 1% en solución acuosa (90 mL) + Fucsina ácida 1% en solución acuosa (10 mL) + Acido acético glacial (1 mL).
c) Solución acido fosfomolíbdico-fosfotúngstico: Acido fosfomolíbdico (5 gr) + Acido fosfotúngstico (5 gr) + Agua destilada 200 mL.
d) Solución de Azul de Anilina: Azul de anilina soluble en agua (2,5 gr) + Acido acético glacial (2 mL) + Agua destilada (100 mL).
e) Solución de acido acético glacial al 1%
- El procedimiento de este método fue el siguiente:
Una vez desparafinada e hidratada la muestra se realizo una tinción con Hematoxilina férrica de Weigert (Sol. a) durante 10 minutos, se lavaron con abundante agua corriente hasta que los núcleos se observaron nítidamente negros y se pasaron por agua destilada. Luego se tiñeron en solución de Biebrich Scarlett-Fucsina acida durante 2 minutos, se lavo en agua destilada en un paso rápido y se coloco en la Solución acido fosfomolíbdico-fosfotúngstico (Sol. c) durante 15 minutos y se lavo rápidamente en agua destilada.
Después se tiñeron en Solución de Azul de Anilina (Sol. d) durante 5 minutos, se lavaron con agua destilada y se colocaron en una Solución de acido acético glacial al 1% (Sol. e) durante 3-4 minutos. Finalmente se deshidrataron en alcohol 95%, luego en alcohol absoluto, aclararon en Xilol y montaron en resina sintética.
- Los resultados esperados para este método son núcleos negros; citoplasma, queratina y fibras musculares rojas; y fibras colágenas azules.
*Manual de Laboratorio de Técnica Histológica (Guía de trabajos y datos útiles para el alumno), Profesor Marco Antonio Loyola Brambilla, Mención de Morfofisiopatología y Citodiagnóstico, Carrera Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción.
