1) Entrecruzamiento, in vivo con formaldehído, del DNA a las proteínas unidas a éste en células para que se fijen las interacciones proteína-proteína y proteína-DNA.
2) Inmunoprecipitación de los complejos proteína-DNA con anticuerpos específicos a partir de extractos sonicados para fragmentar la cromatina.
Las secuencias específicas de DNA inmunoprecipitadas son entonces amplificadas por PCR para determinar si han sido o no enriquecidas en las muestras correspondientes para cada anticuerpo (Kuo y Allis, 1999).
Las proteínas de unión a DNA se entrecruzan con formaldehído al DNA in vivo. La cromatina se aísla y el DNA, junto a las proteínas unidas, se fragmenta por sonicación. Las proteínas unidas al DNA son inmunoprecipitadas usando anticuerpos para aislar el complejo formado con el DNA. Después se revierte el entrecruzamiento para liberar el DNA y mediante PCR se amplifican secuencias específicas.
Referencias
· Kuo MH, Allis CD. In vivo cross-linking and immunoprecipitation for studying dynamic Protein:DNA associations in a chromatin environment. Methods. 1999 Nov;19(3):425-33.
Fuente
http://www.cancerepigenetics.com/tecniquescas.htm
