Acido acético (CH3-COOH / C2H4O2)
*Acido concentrado llamado también ácido acético glacial por su punto de congelamiento de 16,6°C.
*No fija carbohidratos ni lípidos.
*Penetra rápidamente y deja el tejido muy blando.
*Se usa en la precipitación y preservación de nucleoproteínas que de proteínas tisulares.
*Produce un aumento de volumen mayor que el resto de los reactivos fijadores.
*Es coagulante.
*Actúa rompiendo los puentes entre proteínas, exponiendo los grupos hidrofílicos, atrayendo el agua, siendo absorbido y produciendo expansión.
*También existe el ácido fórmico, propiónico y butírico.
*No se utilizan en frotis sanguíneos porque lisan los eritrocitos.
Glutaraldehído (CH2=CHCHO / C5H8O2)
*Es un dialdehído con un grupo aldehído en cada extremo terminal.
*Actúa formando enlaces entre cruzados con proteínas, pero el grupo aldehído extra no participa en muchas reacciones.
*En ocasiones da falso positivo en tinción de PAS.
*Penetra al mismo tiempo que fija pero lo hace lento y pobremente.
*Preserva la ultraestructura mejor que cualqier otro aldehído.
*Sobre endurece el tejido, siendo su tiempo de fijación menos de 2 horas.
*Se tiene que agregar una solucion buffer para dar soporte.
*Debe ser preparado antes de usarlo.
Cloruro de Mercurio (HgCl2)
*Reactivo muy corrosivo.
*No se usa solo, es compuestos es un poderoso coagulante de proteínas y resalta la coloración dejando el tejido muy receptivo a colorantes, en mayor intensidad que todos los otros fijadores.
*Inhibe el congelamiento de tejidos.
*Penetra poco y produce retracción.
*Fijador coagulantes.
*Produce poca distorsión, menos que cualquier otro agente fijador.
*En solución ácida actúa como fijador aditivo formando enlaces cruzados con grupos sulfhidrilos (proteínas) y nucleoproteínas (disulfuro).
*Forma un pigmento que puede ser removido.
*Es tóxico afectando al Sistema Nervioso Central.
Tetroxido de Osmio (OsO4)
*Se utiliza principalmente para Microscopía Electrónica.
*Se usa en postfijación después de un aldehído para asegurar la preservación de lípidos.
*Fija la grasa.
*Solo penetra un par de capas.
*Fijador aditivo.
*Tóxico y caro.
Acido Pícrico / Trinitrofenol (C6H2OH(NO2))
*Fija y además tiñe.
*Fijador coagulante.
*Fuerte fijador de nucleoproteínas pero deja al ADN soluble.
*No fija lípidos ni carbohidratos pero si glucogeno.
*Descalcifica un poco.
*Produce afinidad hacia colorantes acidos (aniónicos, ej: eosina)
*Deja el tejido bien blando.
*Produce leves cambios de volumen.
*Se debe lavar en exceso con alcohol al 70%.
*Si no se remueve produce distorsion de casi todas las estructuras celulares y una posterior mala tinción.
Dicromato de Potasio (K2Cr2O7)
*No se usa solo.
*No coagulante,sin embargo, si se encuentra en solucion ácida si lo es.
*Fija levemente lípidos y disuelve ADN.
*Reacciona tanto con grupos carboxilos e hidroxilos rompiendo enlaces internos de proteínas aumentando el número de aminos, produciendo un aumento en su afinidad hacia la eosina.
Alcohol (etanol y metanol)
*El metanol se usa para fijar extendidos de sangre.
*Etanol se usa para preservar los componentes solubles del tejido como el glicogeno.
*Coagulante no aditivo.
*Rompe enlaces de hidrógeno y enlaces ionicos, removiendo el límite del agua.
*Etanol disuelve lípidos, endurece y retrae en gran cantidad el tejido.
*Formalina + Alcohol fija y comienza el proceso de deshidratación del tejido. Fija glicogeno, penetra rápido y disminuye la retracción.
Acetona (CH3(CO)CH3)
*Coagulante, no aditivo.
*Realiza una fijación rápida a temperaturas bajas y deshidrata también.
*Se utiliza para enzimas que usan como medio de inclusión la parafina.
*Se una principalmente en secciones congeladas para ser teñidas por anticuerpos.
*Causa extrema retracción, distorsión y endurecimiento.
Formaldehído (H2C=O)
*Metanol evita la polimerización a paraformaldehído.
*Aditivo no coagulante.
*Reacciona principalmente con los grupos de aminoácidos con un Hidrógeno reactivo formando puentes metilenicos que unen proteínas entre sí.
*Preserva lípidos pero no los insolubiliza.
*Estabiliza y fija las proteínas tan fuertemente que atrapa el glicogeno.
*Penetra rápido pero fija lento porque demora en formar los enlaces para unir proteínas.
*Produce retracción.
*Endurece el tejido más que todos los reativos fijadores.
*Cuando la solución ácida de formaldehído actúa en tejidos ricos en sangre produce un pigmento microcristalino de coor café oscuro llamado "pigmento formalínico".
*Puede en algunos casos enmascarar o simular microorganismos y formar pigmentos formalínicos frecuentes.
*Es muy hipertónico pro la molécula no es osmoticamente activa.
*Formaldehído + Alcohol se utiliza para fijar y comenzar la deshidratación paralelamente.
BOUIN (C6H2OH(NO2) + H2C=O + CH3-COOH)
*Formado por acido pícrico + Formaldehído + Acido acético glacial.
*Lisa eritrocitos por acción del ácido acético.
*La expansión de volumen provocada por el ácido acético es contrastado por la retracción del ácido pícrico.
*La tinción amarilla producida por el ácido pícrico se retira con la aplicación de Alcohol 70%, sino causa deterioro en la coloración.
*Sirve para aplicarlo en muestras del tracto gastrointestinal.
ZENKER (HgCl2 + K2Cr2O7 + CH3COOH + H2O + NaSO4)
*Compuesto por Cloruro de Mercurio + Dicromato de Potasio + Acido Acético + Agua + Sulfato de Sodio.
Bibliografía
Histotechnoogy A Self Instructional Text, Freida L. Carson, Second Edition, Cap. 1, Pag. 9-23.
*Acido concentrado llamado también ácido acético glacial por su punto de congelamiento de 16,6°C.
*No fija carbohidratos ni lípidos.
*Penetra rápidamente y deja el tejido muy blando.
*Se usa en la precipitación y preservación de nucleoproteínas que de proteínas tisulares.
*Produce un aumento de volumen mayor que el resto de los reactivos fijadores.
*Es coagulante.
*Actúa rompiendo los puentes entre proteínas, exponiendo los grupos hidrofílicos, atrayendo el agua, siendo absorbido y produciendo expansión.
*También existe el ácido fórmico, propiónico y butírico.
*No se utilizan en frotis sanguíneos porque lisan los eritrocitos.
Glutaraldehído (CH2=CHCHO / C5H8O2)
*Es un dialdehído con un grupo aldehído en cada extremo terminal.
*Actúa formando enlaces entre cruzados con proteínas, pero el grupo aldehído extra no participa en muchas reacciones.
*En ocasiones da falso positivo en tinción de PAS.
*Penetra al mismo tiempo que fija pero lo hace lento y pobremente.
*Preserva la ultraestructura mejor que cualqier otro aldehído.
*Sobre endurece el tejido, siendo su tiempo de fijación menos de 2 horas.
*Se tiene que agregar una solucion buffer para dar soporte.
*Debe ser preparado antes de usarlo.
Cloruro de Mercurio (HgCl2)
*Reactivo muy corrosivo.
*No se usa solo, es compuestos es un poderoso coagulante de proteínas y resalta la coloración dejando el tejido muy receptivo a colorantes, en mayor intensidad que todos los otros fijadores.
*Inhibe el congelamiento de tejidos.
*Penetra poco y produce retracción.
*Fijador coagulantes.
*Produce poca distorsión, menos que cualquier otro agente fijador.
*En solución ácida actúa como fijador aditivo formando enlaces cruzados con grupos sulfhidrilos (proteínas) y nucleoproteínas (disulfuro).
*Forma un pigmento que puede ser removido.
*Es tóxico afectando al Sistema Nervioso Central.
Tetroxido de Osmio (OsO4)
*Se utiliza principalmente para Microscopía Electrónica.
*Se usa en postfijación después de un aldehído para asegurar la preservación de lípidos.
*Fija la grasa.
*Solo penetra un par de capas.
*Fijador aditivo.
*Tóxico y caro.
Acido Pícrico / Trinitrofenol (C6H2OH(NO2))
*Fija y además tiñe.
*Fijador coagulante.
*Fuerte fijador de nucleoproteínas pero deja al ADN soluble.
*No fija lípidos ni carbohidratos pero si glucogeno.
*Descalcifica un poco.
*Produce afinidad hacia colorantes acidos (aniónicos, ej: eosina)
*Deja el tejido bien blando.
*Produce leves cambios de volumen.
*Se debe lavar en exceso con alcohol al 70%.
*Si no se remueve produce distorsion de casi todas las estructuras celulares y una posterior mala tinción.
Dicromato de Potasio (K2Cr2O7)
*No se usa solo.
*No coagulante,sin embargo, si se encuentra en solucion ácida si lo es.
*Fija levemente lípidos y disuelve ADN.
*Reacciona tanto con grupos carboxilos e hidroxilos rompiendo enlaces internos de proteínas aumentando el número de aminos, produciendo un aumento en su afinidad hacia la eosina.
Alcohol (etanol y metanol)
*El metanol se usa para fijar extendidos de sangre.
*Etanol se usa para preservar los componentes solubles del tejido como el glicogeno.
*Coagulante no aditivo.
*Rompe enlaces de hidrógeno y enlaces ionicos, removiendo el límite del agua.
*Etanol disuelve lípidos, endurece y retrae en gran cantidad el tejido.
*Formalina + Alcohol fija y comienza el proceso de deshidratación del tejido. Fija glicogeno, penetra rápido y disminuye la retracción.
Acetona (CH3(CO)CH3)
*Coagulante, no aditivo.
*Realiza una fijación rápida a temperaturas bajas y deshidrata también.
*Se utiliza para enzimas que usan como medio de inclusión la parafina.
*Se una principalmente en secciones congeladas para ser teñidas por anticuerpos.
*Causa extrema retracción, distorsión y endurecimiento.
Formaldehído (H2C=O)
*Metanol evita la polimerización a paraformaldehído.
*Aditivo no coagulante.
*Reacciona principalmente con los grupos de aminoácidos con un Hidrógeno reactivo formando puentes metilenicos que unen proteínas entre sí.
*Preserva lípidos pero no los insolubiliza.
*Estabiliza y fija las proteínas tan fuertemente que atrapa el glicogeno.
*Penetra rápido pero fija lento porque demora en formar los enlaces para unir proteínas.
*Produce retracción.
*Endurece el tejido más que todos los reativos fijadores.
*Cuando la solución ácida de formaldehído actúa en tejidos ricos en sangre produce un pigmento microcristalino de coor café oscuro llamado "pigmento formalínico".
*Puede en algunos casos enmascarar o simular microorganismos y formar pigmentos formalínicos frecuentes.
*Es muy hipertónico pro la molécula no es osmoticamente activa.
*Formaldehído + Alcohol se utiliza para fijar y comenzar la deshidratación paralelamente.
BOUIN (C6H2OH(NO2) + H2C=O + CH3-COOH)
*Formado por acido pícrico + Formaldehído + Acido acético glacial.
*Lisa eritrocitos por acción del ácido acético.
*La expansión de volumen provocada por el ácido acético es contrastado por la retracción del ácido pícrico.
*La tinción amarilla producida por el ácido pícrico se retira con la aplicación de Alcohol 70%, sino causa deterioro en la coloración.
*Sirve para aplicarlo en muestras del tracto gastrointestinal.
ZENKER (HgCl2 + K2Cr2O7 + CH3COOH + H2O + NaSO4)
*Compuesto por Cloruro de Mercurio + Dicromato de Potasio + Acido Acético + Agua + Sulfato de Sodio.
Bibliografía
Histotechnoogy A Self Instructional Text, Freida L. Carson, Second Edition, Cap. 1, Pag. 9-23.
